组织捣碎匀浆机关于组织匀浆的制备讲解

　　1.取组织块（0.2g-1g）少可到2-5mg，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，放入5或10ml的小烧杯内

　　2.用移液管量取预冷的匀浆介质或者用0.86％冷生理盐水，匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍，用移液管或移液器取总量的2/3的匀浆介质或生理盐水于烧杯中，用眼科小剪尽快剪碎组织块。

　　3.匀浆的方式有多种：手工匀浆、机器（JJ-2组织捣碎匀浆机）匀浆、超声匀浆、反复冻融。

　　手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6-8分钟），充分研碎，使组织匀浆化。

　　机器匀浆：用JJ-2组织捣碎匀浆机研磨制成10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3-5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。

　　超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎。

　　反复冻融：培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆，也可以反复冻溶3次左右（即让细胞加适量的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰，溶解，再结冰，再溶解，反复3次左右），但有部分酶活力会受影响。

　　取少量组织匀浆做涂片（直接涂片、染色均可），显微镜下观察细胞是否磨破，若没有破则可以延长匀浆时间或增加冻融次数。

　　4.将制备好的10％匀浆用普通离心机或低温低速离心机3000r/min左右离心10-15分钟，若检测ATP酶，则只需要1000转/分，离心5分钟，将离心好的匀浆留下上清弃下面沉淀。

　　根据实验需要，取适量上清液进行各种测定。